ISO/IDF- Metoder i det Mikrobiologiske Laboratorium
Susanne Nielsen
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
www.eurofins.com
MEJERITEKNISK SELSKAB D. 28. MAJ 2015
Hvad er IDF Standardisering af Mikrobiologiske Metoder
Udvikling af en Analyse Standard Igangværende og måske kommende projekter Hvorfor Standardisering
Source presentation EDR: Source modification date: 09/06/2009
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
2
MEJERITEKNISK SELSKAB D. 28. MAJ 2015 FIL-IDF: Federation Internationale de Laiterie- International Dairy Federation Uafhængig, non-profit, non- politisk Forening Grundlagt i 1903 i Bruxelles i forbindelse med den første Internationale Mejeri Kongres
Arbejdsområder: Animal health and welfare Dairy Science and Technology Economics, Policies and Marketing
Environment Farm Management Food Standards Hygiene and Safety Methods of Analysis and Sampling Nutrition Source presentation EDR: Source modification date: 09/06/2009
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
3
IDF er organiseret i National Kommitéer Den Danske National Komité’s formål •er omdrejningspunktet for nationale input til IDF •viderebringer resultatet af arbejdet i FIL-IDF Danmark •nominerer repræsentanter til IDF's stående komitéer •virker til at fremme IDF inden for mejeriindustrien •er ansvarlig for at formidle det nationale bidrag til IDF's finansiering (via Mejeriforeningen)
Sekræter for den danske kommitè: Sanne Bastholm Rasmussen
[email protected] PT er 46 lande medlemmer og repræsenteret ved en National Komité F.eks. Zimbabwe, Mongoliet og Norge Under National Komitéen er en række arbejdsgrupper
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
4
IDF’s organisation Science and Programme Coordination Committee SPCC
Methods Standards Steering Group MSSG SCHMM
SCAMDM
Harmonization of Microbiological Methods
Analytical Methods for Dairy Microorganisms
PG D07 Lb casei/paracasei
Food Standards Steering Group FSSG
PG D06 QUA LAB Flowcytometri
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
5
Standardisering og harmonisering af Mikrobiologiske Metoder
FIL-IDF
ISO
CEN
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
6
Udvikling af en Analyse Standard Stage 0: Undersøgelse af et emne, f.eks en ny analyse teknik, som endnu ikke er klar til de næste trin Stage 1: New Work Item (NWI) Forslag til ny metode sendes typisk fra en National komité til IDF Forslaget skal indeholde en Working Draft eller min. en klar beskrivelse OG forslag til Projektleder NWI accepteres efter afstemning Krav: Min. 50% af medlemslandene skal svare på afstemningen og min. 50% af svarene skal være positive Stage 2: Udabejdelse af Committee Draft (CD) og fremsendelse til kommentering bland Projektgruppens medlemmer og SC Bearbejdning af kommentarer, udarbejdelse af rapport med indkomne kommentarer og PL ‘s svar på kommentarer, planlægning af et ‘Interlaboratory study’ til fastlæggelse af præcisionsdata Stage 2 slutter når resultaterne fra dette studie er godkendt af PG og SC
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
7
Interlaboratory Study 2007 ISO 22964 Detection of Cronobacter spp. ESIA CSB
mDFI
ESPM ESIA CB- 44°C
mDFI ESPM
67 prøver ESIA CB- 41,5°C
804 resultater x 12 laboratorier 9648 resultater !
mDFI ESPM ESIA
mLST
mDFI ESPM
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
8
I 2013 ny ILS med Standardens endelige media Milk based Infant Formula Soy based Infant Formula Lactose Starch Environmental Samples
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
9
Stage 3: EN Draft International Standard (DIS) udarbejdes på engelsk og evt. fransk DIS sendes til National Komitéer for godkendelse IDF og ISO udarbejder rapporter der inkluderer alle indkomne kommentarer Stage 3 afsluttes med at PL sender den godkendte og afsluttede DIS (nu FDIS) sammen med kommentarer og svar til IDF’s og ISO’s sekretariat Stage 4: Iht. ISO procedurer skal FDIS til afstemning internt i ISO før udgivelse Der afgives ja/nej stemme og kun stavefejl/trykfejl kan rettes IDF godkender DIS versioner til direkte udgivelse Stage 5: Standarden gennemgåes en sidste gang for trykfejl etc. hvorefter den udgives. Projektgruppen nedlægges herefter Review: Senest 3 år efter udgivelse skal Standarden revurderes og herefter hvert 5. år
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
10
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
11
Igangværende projekter 2 Stående komitéer: SCAMDM: Analytical Methods for Dairy Microorganisms- de gode bakterier
SCHMM: Harmonization of Microbiological Methods- de onde bakterier
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
12
SCAMDM Igangværende Projekter
Project D06 PL : S Casani (DK)
Project D07 PL : G Fischer (DE) and A Galat (FR)
Quantification of Lactic acid bacteria by Flow Cytometry
Enumeration of Lactobacillus casei/paracasei in fermented milks and starter cultures
NWI Project D08 PL : TBD
Quantification of LAB (Lactic acid bacteria) by use of qPCR or v-qPCR PL Report
Project D09 PL : T Odamaki (JP) PL Report
Revision of ISO 29981 | IDF 220 – Enumeration of bifidobacteria
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
13
Forslag til revision af ISO 22981/IDF 220 Enumeration of presumptive Bifidobacteria
Our results suggested that the suspension conditions including diluents, retention time and shaking had much impact on enumeration of bifidobacteria. We found that in comparison to ISO 29981|IDF 220 method, lower temperature for suspension without retention and shaking with a rotary blender using Mitsuoka’s buffer, a diluent devised and reported by Professor Mitsuoka who received IDF Elie Metchnikoff Prize 2007, could provide stable and adequate counts for enumeration of bifidobacteria.
-
Brug Mitsuoka’s buffer i stedet for Ringers Temperatur under opløsning skal være 35°C Brug blender til opløsning
‘Til næste gang’: - Lav sammenligning mellem Mitsuoka’s buffer og MRD istedet for Ringers (som ingen bruger) - Start med -2 fortynding for at få bedre opløsning istedet for at bruge en blender Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
14
SCHMM Igangværende Projekter Project H03 IDF representative: H Joosten (CH)
ISO/TS 22964 | IDF/RM 210. (revision to horizontal IS) New title: Detection of Cronobacter spp.) – CEN TC275 WG6 TAG 14 (Revision of EN ISO 22964)
Ny standard senest Oktober 2016
Project H17 IDF representative & PG co-convenor: B Gerten
ISO/TC 34/SC 9-WG 16 - Yeasts and moulds (Revision of EN ISO 215271/-2)
Ask SC5/IDF delegates about the possible change in ISO 6611 of YGC to DRBC Decide to perform the revision with these recommendations: Base the revision on previous ISO 7954 from SC9 or ISO 6611 from SC5, and update all parts such media performance, if we take ISO 6611 we can harmonize with SC5. choose between DRBC or YGC, choose between surface inoculation or pour plate, maintain a general assay with YGC/DRBC and put an annex for DG18 and products for aw between 0.95 and 0.6 For product below aw<0.6, Management? No real media For WG3, data of validation are enough or not to establish this standard. Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
15
Project – new (tbd) IDF representative: TBD
ISO/TC 34/SC 9-WG 20 – Confirmation of Bacillus cereus (Revision of EN ISO 7932)
Project – new (tbd) IDF representative: TBD
ISO/TC 34/SC 9-WG 26 – Detection of Clostridium botulinum toxins
Den selektive opformering udgår
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
16
Does ISO/TC34/SC9 agree with following WG 20 proposal: - To not include additional tests for differentiation of Bacillus thuringiensis from presumptive B. cereus in the revision of ISO 7932; - To not include additional tests for confirmation of B. cereus sensu stricto; - To investigate possible additional tests to identify pathogenicity of presumptive B. cereus colonies. Proposed recommendations to be approved by ISO/TC 34/SC 9 To revise EN ISO 7932:2004 by adding in the confirmation stage PCR detection of 2 specific genes, as optional tests on isolated colonies: - Cytk1, specific of the new B. cytotoxicus species, an emerging and virulent pathogen from the B. cereus group; - Cereulide genes, harboured by emetic toxin producing strains of B. cereus (sensu lato). Benefits and limitations of such additional tests should be added in the standard.
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
17
Problem: Tilstedeværelsen af visse Mælkesyrebakterier og Bifidobakterier hæmmer væksten af Enterobacteriaceae, Cronobacter spp., Salmonella spp Improvement of enrichment procedure for Enterobacteriaceae (incl. Salmonella and Cronobacter). • Previous work with an alternative buffer (tricine) addition of iron citrate and application of a higher initial pH was unsuccessful. • Poor recovery was associated with strong acidification (final pH often below <5) • A new pre-enrichment broth is proposed based on BPW with a six-fold increased phosphate buffer strength (“xsBPW”) • Study of growth kinetics of Salmonella and Cronobacter in xsBPW shows major improvement. • LOD50 values below 1 cell per 25 g sample were obtained with the most demanding matrices • Cost xsBPW similar to that of “double strength BPW” • Variability of growth potential among different Enterobacteriaceae raises concern about current validation requirements Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
18
Revideret standard forventes ved udgang 2016 Væsentligste ændringer: Inkubationstider, herunder mulighed for inkubation af hel Fraser i 24 timer i stedet for 48, såfremt fokus er Listeria monocytogenes Konfirmerings og identifikations trin Præcisionsdata fra ILS fremgår af standarden
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
19
Hvorfor er standardiserede analysemetoder en god idé?
-
Et analyseresultat er en funktion af forekomst og fordeling af den givne parameter, den anvendte metode og metodens usikkerhed
-
Et mikrobiologisk kriterie bør altid bestå af en fastsat værdi og en analysemetode
BEK om mælkeprodukter m.v. Nr. 2 af 04/01/2013
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
20
Case: Bestemmelse af L. delbrueckii subsp. bulgaricus i fermenteret produkt. Metode: ISO 7889/IDF 117:2003 Problem: Udover L. delbrueckii subsp. bulgaricus indeholdt produkt også L. acidophilus L. acidophilus vokser udmærket i substratet og kolonier ligner Løsning: Udfør MALDI-TOF identifikation på 5-10 kolonier Resultat: Alle kolonier (20 ialt) blev identificeret som L. rhamnosus! MALDI-TOF resultat blev efterfølgende konfirmeret ved 16S seq
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
21
Case: E. coli
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
22
Case: Aerobe sporedannere
Problem: Kunde hævder vi finder væsentligt færre sporedannere end de selv og deres kunde gør i udvalgte produkter 3 metoder:
Metode Forbehandling
Udsæd
Substrat
Inkubations tid
Inkubations temp.
FVST 2007
80°C/ 10 min
overflade
Blodagar
6 døgn
30
NMKL 189
80°C/ 10 min
overflade
Blodagar
8 døgn
30
‘Tysk80°C/ metode’ 10 min
overflade
TSA
3 døgn
30
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
23
Analyseresultater metode sammenligning
Aerobe mesofile sporedannere/g Prøve
FVST 2007
NMKL 189
‘Tysk metode’
1
270
230
420
2
270
300
390
3
370
520
530
4
380
150
560
5
200
220
310
6
440
370
770
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
24
Tilsyneladende overensstemmende resultater- men stadigvæk for lavt- nu på alle metoder
Prøve
pH i 10% opl. Aerobe sporer cfu/g, FVST 2007
10 g prøve 1a + 90 g SPO
4,36
310
10 g prøve 1a + 90 g BPW
6,66
4600
10 g prøve 1b + 90 g SPO
4,36
190
10 g prøve 1b + 90 g BPW
6,66
3600
10 g prøve 1c + 90 g SPO
4,36
150
10 g prøve 1c + 90 g BPW
6,66
3800
10 g prøve 2 + 90 g SPO
5,36
7400
10 g prøve 2 + 90 g BPW
6,56
6300
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
25
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
26
ISO-IDF metoder er referencemetoder Brug kun alternative metoder der er valideret iht. ISO 16140 eller tilsvarende overfor referencemetoden Når du udarbejder specifikationer for dine produkter: Referer til analysestandard Vær specifik vedr. -
Prøveudtagning- repræsentativ, kun overflade, kun indre etc. Prøveforberedelse
Vær bevidst om de kritiske step i metoden
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
27
TAK FOR OPMÆRKSOMHEDEN
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
28
